Hibridizarea in situ este o metodă de detectare a aberațiilor cromozomiale. Aceasta implică etichetarea specifică cromozomi cu flouroscent coloranți și legându-le de o sondă ADN. Această tehnică este utilizată pentru diagnosticul prenatal al mutațiilor genetice.
Ce este hibridizarea in situ?
Hibridizarea in situ implică etichetarea specifică cromozomi cu flouroscent coloranți și legându-le de o sondă ADN. Această tehnică este utilizată pentru diagnosticarea prenatală a genă mutații. Hibridizare in situ sau hibridizarea in situ a fluorescenței implică detectarea genetică moleculară a acizi nucleici din ARN sau ADN în țesuturi specifice sau într-o celulă. În mod normal, acest tip de diagnostic este utilizat pentru a detecta o anomalie cromozomială structurală sau numerică în sarcină. În acest scop, se utilizează o sondă produsă artificial, care constă în sine din acid nucleic. Se leagă apoi de acizi nucleici în organism prin asocierea bazelor. Această legare este menționată prin termenul de hibridizare. Detectarea se efectuează pe structura vie a pacientului și, prin urmare, corespunde detectării in situ. De distins sunt metodele in vitro, în care detectarea are loc în eprubetă. Metoda a fost dezvoltată în secolul al XX-lea de oamenii de știință Joe Gall și Mary Lou Pardue. Tehnica a evoluat de atunci. De exemplu, în timp ce s-au folosit sonde radioactive atunci, sonde marcate cu fluoroscență cu o legătură covalentă la etichetare molecule sunt folosite astăzi.
Funcția, efectul și țintele
Hibridizarea in situ este de obicei utilizată pentru a detecta aberații cromozomiale, anomalii cromozomiale care nu pot fi detectate într-o cariogramă. Astfel, metoda este întotdeauna utilizată atunci când bolile ereditare urmează să fie determinate în timpul sarcină. Deoarece aberațiile cromozomiale sunt o problemă care nu ar trebui subestimată astăzi, aplicarea metodei a crescut în timp. Hibridizarea se realizează folosind celule native de la mamă lichid amniotic. Baza tehnicii este legarea sondei marcate de culoare de fragmente de ADN. Datorită legării, un microscop poate fi folosit ulterior pentru a evalua numărul de copii, deoarece copiile individuale emit un semnal luminos și pot fi astfel făcute vizibile la microscop. Există diferite proceduri în acest sens. Fie analiza are loc imediat după legare. În acest caz, un colorant de fluoroscență, cum ar fi biotină este utilizat, care este legat direct de sonda ADN. În metoda indirectă de hibridizare in situ, analiza nu poate fi efectuată imediat după hibridizare, deoarece substanțele fluorescente se pot lega de sondă numai după hibridizare. Această metodă indirectă este mai frecvent utilizată decât metoda directă, deoarece este considerată mai sensibilă. Tehnicile includ sonde ADN centrometru specific cromozomului, sonde ADN locus specifice, sonde bibliotecă ADN specifice cromozomilor și hibridizări comparative ale genomului. Sondele ADN centromer specifice cromozomului pot fi utilizate pentru a detecta anomalii numerice cromozomiale. Adică, acestea sunt utilizate în principal atunci când sunt duplicate sau șterse cromozomi sunt suspectate. Sondele de ADN specifice locusului sunt adecvate în principal pentru detectarea mutațiilor minime care nu pot fi detectate în cariogramă. O sondă de bibliotecă ADN specifică cromozomului este utilizată în special pentru a detecta inserții și translocații. Hibridizarea comparativă a genomului, pe de altă parte, este o analiză cuprinzătoare a pierderilor și câștigurilor din materialul cromozomial. Astăzi, hibridizarea in situ are o mare importanță în diagnosticul diferitelor mutații cromozomiale. În diagnosticul Sindromul Down, de exemplu, sondele se leagă de cromozomul 21. În acest scop, se folosesc de obicei sonde specifice cromozomilor, care pot fi aplicate în cazurile de suspiciune a acestei boli. O suspiciune poate apărea, de exemplu, dacă părinții au născut anterior un copil cu boală și ultrasunete imaginea este vizibilă. Dacă există o triplă mai degrabă decât o dublă egalitate, rezultând un semnal triplu de culoare, diagnosticul este considerat confirmat.
Riscuri, efecte secundare și pericole
Spre deosebire de PCR, de exemplu, hibridizarea in situ este mult mai puțin susceptibilă la contaminare. În plus, timpul necesar pentru procedură este extrem de redus. Cu toate acestea, deoarece embrionii formează în special modele cromozomiale, orice model prezent nu poate fi utilizat pentru a deduce cu certitudine restul cromozomial distribuire și astfel statutul genetic al altor celule. Semnalele de culoare se pot suprapune sau rămâne invizibile din alte motive. Astfel, hibridizarea in situ ca instrument de diagnosticare în timpul sarcină este relativ predispus la erori. Pot apărea diagnostice greșite și părinții pot decide împotriva unui sănătos embrion. Pentru a reduce gradul de eroare al hibridizării in situ, cel puțin două celule embrionare ar trebui examinate simultan. Prin examinarea a două celule în paralel, există acum doar un risc neglijabil de diagnostic greșit. Prin urmare, părinții se pot baza pe diagnostic într-un astfel de caz. Hibridizarea in situ nu este oferită fiecărei femei însărcinate, ci doar femeilor dintr-un grup de risc. Cu toate acestea, femeilor însărcinate nu li se refuză acest tip de diagnostic la cererea lor. Anormal ultrasunete descoperirile sau un ser anormal pot determina un medic să ofere procedura de diagnosticare. Astăzi, hibridizarea in situ poate fi utilizată pentru a diagnostica o proporție mare de aberații cromozomiale, dar în niciun caz pe toate. Prin urmare, hibridizarea in situ nu trebuie efectuată niciodată singură, ci trebuie utilizată întotdeauna împreună cu un test convențional al cromozomilor. Îngrijirea gravidei joacă un rol major în această procedură. Prin urmare, înainte de analiză, are loc o discuție aprofundată asupra metodei de diagnostic cu viitoarea mamă, informând-o despre riscurile, posibilitățile și limitările tehnicii.
