Hibridizarea in situ a fluorescenței (FISH) este o metodă de screening genetic pentru detectarea ADN-ului (acidul dezoxiribonucleic) în nucleele celulelor individuale.
Această metodă implică utilizarea unor sonde ADN specifice care pot furniza informații doar despre regiunile genomice pentru care sonda utilizată este specifică.
Indicații (domenii de aplicare)
- Suspiciune de aberație numerică cromozomială:
- Detectarea anomaliilor numerice cromozomiale (de exemplu, trisomia 21).
- Pentru cuantificarea mozaicurilor pentru aberații cromozomiale (de exemplu, în Ullrich-sindromul Turner).
- Detectarea microdelecțiilor (de exemplu, monosomia 22q11.2).
- Detectarea aberațiilor cromozomiale (de exemplu, leucemie limfocitară cronică (CLL), non-Hodgkin limfom).
Indicațiile de mai sus sunt analizate prin interfața FISH (a se vedea „Procedura de laborator” pentru detalii).
Procedura
Material necesar
- Sânge de heparină (minim 1-2 ml)
Pregătirea pacientului
- Nu este necesar
Factori perturbatori
- Nu stie nimeni
Metoda de laborator
Hibridizarea in situ a fluorescenței (FISH) implică utilizarea sondelor de ADN marcate fluorescent (sondele FISH). Acestea se pot lega de un site ADN specific de pe un cromozom, care se numește hibridizare. La sau după legarea sondei marcate fluorescent, evaluarea poate fi efectuată cu ajutorul microscopului. În acest proces, se determină numărul de semnale de fluorescență din nucleele interfazice. Mai mult, o evaluare a localizării (de exemplu, translocația / deplasarea locației / către un alt cromozom) la metafază cromozomi este posibil.
Când este diferit fluorescent coloranți sunt utilizate pentru ADN-uri țintă diferite în procedura FISH, este denumit FISH multicolor. Acest lucru permite vizualizarea completă a genomului.
În unele cazuri, sonda ADN nu este marcată direct cu un colorant fluorescent, care se numește procedură indirectă. În schimb, este etichetat cu substanțe precum biotină sau digoxigenină. Această metodă este considerată mai complicată, dar este mai sensibilă.
