Singur-genă analiza este o metodă de testare genetică direcționată.
În cadrul acestei proceduri, dacă se suspectează o boală ereditară, care este declanșată de o singură modificare a unui genă, se examinează gena suspectată ca cauzală. Acest lucru este, de asemenea, adesea făcut în mod obișnuit ca parte a examinărilor de screening.
Indicații (domenii de aplicare)
- Diagnosticul bolilor monogene de ex fibroză chistică.
Procedura
Material necesar
- Sânge de heparină (minim 1-2 ml)
Pregătirea pacientului
- Nu este necesar
Factori perturbatori
- Nu stie nimeni
Metoda de laborator
Cel mai adesea, metoda de secvențiere utilizată îngenă analiza este metoda Sanger, numită și sinteza de terminare a lanțului, unde se ajunge mai întâi la izolarea ADN-ului de la sânge. Apoi, toate hidrogen legăturile care servesc la menținerea ADN-ului bicatenar împreună sunt rupte. După încălzirea la 94-96 ° C timp de un minut, sunt prezente două fire simple. Apoi, are loc așa-numita hibridizare a primerului, prin care este atașat un primer. Aceasta are loc la aproximativ 60 ° C. Un primer este o oligonucleotidă (oligomeri compuși din câteva nucleotide) care servește ca punct de plecare pentru replicarea ADN-ului enzime precum ADN polimeraza. După hibridizarea primerului, are loc extinderea, în care temperatura este crescută la 72 ° C. Aceasta permite grundului să se atașeze la ADN polimeraza (enzime care sintetizează ADN). După o medie de 30 de cicluri, procedura poate fi oprită.
O analiză suplimentară este efectuată de capilar electroforeză în secvențiale automate. Rezultatul se numește electropherogramă. Aceasta arată diferite culori care indică secvența de bază.
Prin această metodă, pot fi detectate mutații care implică doar o singură bază nucleică într-o genă, cunoscută și sub numele de mutații punctiforme.
